GB4789.15-2016变化及解读范围（章节对于第二法）

GB4789.15-2016变化及解析

范围章节

针对第二法适用于蔬菜酱罐头，罐头这两个字运用的不具体。也就说是番茄酱，无论是不是罐头，还是软包装，都是用第二法检验的。

设备和材料章节

变化：将均质器的名称具体为：拍击式均质器或均质袋（2.2）

解析：以前的版本都是运用震荡的方式来进行样品表层的清洗，均质不够，另外有些实验室，使用的是旋转刀均质器，可能会把霉菌的菌丝切断。所以本次修订对均质方式进行了确立的要求。

变化：无菌试管规格由10mmX75mm修改为18mmX180mm（2.6）

解析：规定成粗大的试管，有促使进行样品稀释液的混匀，否则在小试管里面很难充分混匀。

变化：增加了微量移液器及枪头1.0mL（2.11）

解读：这是为了包容实际工作中常用的方法。实际上建议你们购买可整支高压灭菌的移液器。

变化：删除了无菌广口瓶：500mL

解读：以前的标准还包含牛皮纸袋这一类包装材料，现在实验室基本都不使用了。

变化：删除了冰箱和恒温震荡器。增加了漩涡混合仪。增加了恒温水浴

解读：删除了冰箱和恒温震荡器，因为标准没有用到。增加了漩涡混合仪，主要是即使要求反复的吹吸样品稀释液，容易造成产生有害气溶胶，并降低污染机会，用漩涡混合仪可以来确保样品稀释液的均匀，减少污染。增加了恒温水浴，主要为了精确控制倾注琼脂的浓度。

培养基和试剂章节

变化：增加了生理盐水（A.1）：

生理盐水：85g氯化钠加入1000mL蒸馏水中，搅拌至完全溶化，分装后，121℃灭菌15min，备用。

增加了醋酸盐缓冲液（A.4）：

贮存液：称取34.0g的乙酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用至少175mL的１mol／L氢氯化钾溶液调节pH至7.2±0.1，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。

稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。

解析：增加两种稀释液也有为了便于大家的实验室工作，因为一直是相同一份样品，需要做菌落数量、大肠菌群和霉菌。另外重新称重换稀释液的话，实验室工作量太大了。

变化：修改了西红柿葡萄糖琼脂和孟加拉红琼脂配制的灭菌时间（A.2.2、A.3.2）

解析：2010版中两者的灭菌时间均为20min，2016版将时间增加为15min。太长时间的高压灭菌可能会破坏糖类。

变化：修改了倾注平板的方法（5.1.6）

解读：2010版在倾注平板前，有用少量酒精溶解氯霉素加入培养基中的步骤，在2016版中已将此部分内容删除。氯霉素能够耐高压杀菌，所以直接加的培养基中再灭菌就便于了，以前的方式太繁琐。

检验程序和操作方法章节-第一法

变化：2010版中只有无菌蒸馏水作为稀释液，而在2016版中提高了生理盐水及碳酸盐缓冲液。（5.1.1）

解析：增加两种稀释液也有为了便于大家的实验室工作，因为一直是相同一份样品，需要做菌落数量、大肠菌群和霉菌。另外重新称重换稀释液的话，实验室工作量太大了。

变化：将平皿中马铃薯香蕉糖琼脂和孟加拉红琼脂培养基的使用量由15mL~20mL改为20mL~25mL。（5.1.6）

解析：这是为了符合国标GB4789.28-2013版针对培养时间达到48小时的培养基应倾注四毫米左右的宽度和二十毫升以上量的相

应要求。

变化：增加了平板正置培养的要求

解读：正置培养是导致在反复观察的过程中，上下颠倒平板导致霉菌孢子扩散产生次生小菌落的一种方法。（5.2）

变化：霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌落蔓延（5.3）

解读：上个版本原本对这种的状况报告为多不可计，实际上其实是错误的。

结果和报告章节

变化：增加了两种结果的计算方式：

若有两个稀释度平板上菌落数均在10CFU~150CFU之间，则按GB4789.2的公式进行计算。（6.1.2）

若所有稀释度的平板菌落数均不在10CFU~150CFU之间，其中一个别小于10CFU或高于150CFU时，则以最接近10CFU或150CFU的平均菌落数除以稀释倍数计算。（6.1.6）

增加了若空白对照平板上有菌落出现，则此次测试结果无效的内容。（6.2.3）

解析：这些的要求，都是参照了菌落数目的计数方式，对霉菌和酵母计数的最后报告方法进行具体的要求，以前版本的标准这方面有缺陷。

变化：菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告。（6.2.1）

解读：上个版本，是菌落数在100以内时，按照四舍五入原则修约，采用两位有效数字报告。……按照这个要求，10以内的菌落数会报告成8.5

第二法--操作方法章节

变化：洗净郝氏计测玻片，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的摊布于计测室，以备观察。

解析：这里的标准液，其实是样品稀释液。

依然未解决难题汇总

本次新版标准，依然有三个技术难题没有解决：

第一个，就是没有改变使用28℃培养，与美国FDA用较低温度培养的技术变化问题。

第二个，就是没有确立如何分辨霉菌和酵母菌落形态，又规定分别计数报告总数的问题。

第三个，就是要求五天培养，但是实际上从第一天就必须开始观察并清除这些尚未开始蔓延的霉菌菌落。

等待将来新标准能有解决以上几个难题！

GB4789.15历代版本演变

GB4789.15历代版本演变

标准号

GB/T4879.15-1984

GB/T4879.15-1994

GB/T4879.15-2003

GB4879.15-2010

GB4879.15-2016

名称

霉菌和酵母数检测

霉菌和酵母计数

霉菌和酵母计数

霉菌和酵母计数

霉菌和酵母计数

稀释液

无菌蒸馏水

无菌蒸馏水

无菌蒸馏水

无菌蒸馏水

无菌蒸馏水、生理盐水、磷酸盐缓冲液

培养基

孟加拉红琼脂、高盐察氏培养基

PDA、孟加拉红琼脂、高盐察氏培养基

PDA、孟加拉红琼脂、高盐察氏培养基

PDA、孟加拉红琼脂

PDA、孟加拉红琼脂

培养温度时间

25~28℃

3d~7d

25~28℃

3d~5d

25~28℃

3d~5d

28±1℃

5d

28±1℃

5d

培养方法

倒置

倒置

倒置

倒置

正置

单位

个/g或

个/mL

个/g或

个/mL

CFU/g或

CFU/mL

CFU/g或

CFU/mL

CFU/g或

CFU/mL

其他

附录B变成第二法